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層析柱的使用

更新時(shí)間:2018-01-25瀏覽:1981次
  關(guān)于層析柱裝柱、使用及相關(guān)注意事項(xiàng)
 
  (1)、裝柱前要仔細(xì)看填料的使用說(shuō)明書(shū),每種填料都有自己的特性,以及特殊的裝柱方法,針對(duì)不同的空柱,也要注意方法可能不同;
 
  3、這一點(diǎn)非常重要:裝柱包括以后使用中不允許柱內(nèi)進(jìn)入氣泡(bubble free),柱頭事先也要排除氣泡。
 
  (2)、填料要加水?dāng)嚢璩删鶆驊乙?,懸液濃度依填料而不同,一?0-85%,迅速倒入空柱內(nèi),或吸或壓,流速和具體步驟看說(shuō)明書(shū)。
 
  (3)、所有柱子盡量做到填料均勻,尤其是用于凝膠層析的柱子。裝柱完成后,可用柱效測(cè)定的方法檢查裝填效果。一個(gè)裝填合格的柱子的理論塔板高度應(yīng)是填料平均粒徑的2-4 倍,在此范圍內(nèi)越小越好。
 
  (4)、選擇合適的泵,首先是流速滿足要求,脈沖盡量小。柱塞泵。
 
  (5)、準(zhǔn)備上柱的液體應(yīng)進(jìn)行過(guò)濾,至少是0.45micrometre。
 
  (6)、關(guān)于純化,首先要考慮的是你的目標(biāo):純度、數(shù)量、速度、收率等等,再根據(jù)樣品的具體情況,尤其是目標(biāo)蛋白的性質(zhì),確定純化策略。通常三步曲:capture、purification、polishing。*步先從大量或復(fù)雜樣品中將目標(biāo)蛋白%26ldquo;抓出%26rdquo;,與主要雜質(zhì)分離;再用高選擇性的層析去除絕大部分雜質(zhì);zui后精細(xì)純化,提供純度至設(shè)定目標(biāo)。到實(shí)際工作中,不要死靠三步,也許一步也許四步或更多,具體情況具體分析。所謂%26ldquo;三步%26rdquo;只是一種思路而已。
 
  (7)、至于測(cè)序,我想大概不到1mg 應(yīng)該足夠了。

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